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造血祖细胞的体外检测

造血干/祖细胞没有特异的形态学特点,无法辨认。干细胞初期分化而形成的最早期的祖细胞CFU-HPP、LTC-IC等检测可反映体内干细胞的存在及变化。为了解CD34+细胞样品中干细胞的含量或推测体内是否存在干细胞,应做最早期祖细胞CFUHPP(培养28天以上)或LTC-IC(长期培养至少5周)的检测。或不做上述培养,而做CD34+CD33、HLA-DR或CD34+Thy1+Lin-等反映干细胞表面标志的多参数流式细胞术检测,比做CFU-HPP、LTC-IC培养更省事,定量也可靠。

一个祖细胞培养形成的集落由许多形态可辨认的前体细胞和成熟细胞所组成。如果一个集落的所有细胞是一个细胞增殖分化的后代,这个集落便具有克隆性(clonality)。集落不一定都具有克隆性。有专门技术可以检测集落的克隆性。从理论上说,祖细胞体外培养的集落应该具有克隆性,即每个集落源自一个祖细胞。所以集落计数反映祖细胞数量。然而,集落与克隆的含义毕竟不同,不可混用。“集落”(colony)是可见又可数的名词,而“克隆”(clone)是指由单个细胞经无性繁殖而形成的纯一的细胞群体,是不可数的抽象名词。做集落计数不可称之为“克隆计数”,各种CFU的计数单位应该是“集落”而不是“克隆”。克隆和集落的制备和检测的方法完全不同,二者不可混同。

在体外培养能形成集落的祖细胞,又称为集落形成细胞(colony forming cell,CFC)。经培养后所形成的集落内都是CFC的后代细胞,即是形态可辨认的前体细胞。每一个这样的集落源自一个CFC,在集落计数时称这些集落为“集落形成单位”(colony forming unit,CFU)。CFU和CFC都代表祖细胞,CFU是CFC经培养形成集落后可计数的单位。如粒单系祖细胞CFC-GM经培养后形成可作计数的粒单系细胞集落,称为CFU-GM。一个CFU-GM代表一个CFC-GM。但在培养皿中见到的不是CFC,而是CFU。

培养21天的CFU-GEMM、pBFU-E、BFU-MK等均代表早期祖细胞,但它们不如最早期祖细胞CFUHPP和LTC-IC那样直接地反映干细胞的存在及变化。至于培养14天(或更短期)的mBFU-E、CFUGM,以及培养不到1周的CFU-E等只能代表没有临床移植价值的晚期祖细胞。

早期和晚期祖细胞集落的区别

早期和晚期祖细胞集落的区别

注:**反映正常造血组织中含量

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