化学发光免疫分析法的基本原理及试剂

基本原理

化学发光免疫分析法（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光反应与免疫反应结合的一种定量分析的方法，既有发光检测的高度灵敏性，又有免疫分析法的高度特异性。CLIA包括免疫反应和化学发光两个系统。免疫反应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）直接标记在抗原（化学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析）上，或酶作用于发光底物。化学发光系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号测量仪器测量光量子产额。根据化学发光标记物与发光强度的关系，可利用标准曲线计算出被测物的含量。

试剂

目前CLIA均有商品化的试剂盒，CLIA必须具备以下6种试剂。

1. 标准抗原：标准抗原应与待测物质的理化性质相适应，与其相对分子质量、化学结构最好保持一致。一般来说，如果是当做标准品用的抗原，应该经过高度提纯，纯度越高越好。至于基因重组的标准抗原，要求相同。
2. 抗体：要求是效价、亲和力和特异性都高的单克隆抗体。
3. 分离剂：用（羊）抗鼠IgG抗体包被于磁性颗粒表面，以进行磁性分离。
4. 碱性磷酸酶标记抗原（ALP-Ag）：为常用的标记酶，基本要求是既要保持ALP的催化特征，同时也不能损伤抗原的理化特性。
5. 发光底物：AMPPD为磷酸酯酶的直接发光底物，可用来检测碱性磷酸酶或抗体、核酸探针及其他配基的结合物。经ALP催化水解生成一种不稳定的阴离子，后者分解时可持续发光，发光强度稳定，与ALP的量成正比。ALP-AMPPD发光体系具有非常高的灵敏度。
6. 洗涤液：用磷酸盐缓冲液配制。