什么是染色体DNA限制性内切酶图谱分析？

答：染色体DNA限制性内切酶图谱分析（restriction endonuclease analysis of chromosomal DNA，REA），染色体DNA经高频切割、限制性内切酶消化获得酶切图谱。不同的DNA所具有的限制性酶切位点的种类和数目不同，用相同的酶切产生不同大小和数目的酶切片段，借以区分不同的DNA。同种不同株细菌也可能具有不同的酶切图形，但流行相关菌株具有相同或相似的图形。限制片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）即是指限制性内切酶在特定基因组区域切割位点的多样性特点。REA分型是一种快速、灵敏、分辨力较强的分子分型技术，适合于大规模的流行病学研究，但不足之处是酶切片段较多，图谱解释困难，并容易受质粒DNA污染。在此基础上，结合DNA印迹技术（Southern印迹），即将酶切、电泳后的DNA片段转移、固定于支持物上，与特异探针进行杂交后显示出目的DNA片段，可大大简化分析过程。基因特异性探针已用于鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌的分析等。缺点是RFLP-Southern印迹必须经过滤膜转移和Southern杂交，费时、费力、周期长。此外，检测视野窄，只能检测那些已知的、改变限制性内切酶位点序列的DNA变异，RFLP连锁图上还有很多大的空间区，灵敏度不高，限制了其进一步发展。核糖体分型（ribotyping）E6j是RFLPSouthern印迹的进一步发展，专门针对rRNA基因。rRNA基因在大多数原核生物中都具有多个拷贝，其中16S rRNA序列由于大小适中（约1.5kb），既能体现不同菌属之间的差异，又能通过测序技术容易得到序列。核糖体分型只有很少的条带，易于解释，但同时也限制了对近缘菌的区分。较其他方法而言，核糖体分型更适用于确定属及属以上分类单位的亲缘关系。