答:美国CLSI组织的文件MM-18A《DNA靶基因序列鉴定细菌和真菌的解释标准;批准指南》详细介绍了广谱基因测序技术(broad-range gene sequencing)在细菌与真菌鉴定中的应用,其中综合
1请简述基于广范围PCR的基因测序鉴定病原细菌、真菌的技术流程。答:目前,大多数的DNA自动荧光测序仪均采用双脱氧链终止测序法。细菌的DNA测序鉴定,首先是提取细菌的基因组DNA,以
2答:目前,用于真菌广范围PCR扩增的基因主要有真菌ITS区间、28S rRNA基因D1/D2区,具体的引物见下表。真菌ITS区间的PCR扩增参数基本如下:94℃5分钟;94℃ 1分钟,57℃ 1分钟,72℃ 1分钟
3细菌16S rRNA基因广范围PCR扩增的引物主要有哪些?扩增参数如何?答:目前,16S rRNA基因的广范围引物序列已经公开(下表)。由于细菌16S rRNA基因的前500bp的变异较大,包含了丰富的种属
4常用于细菌的广范围PCR检测的靶基因有哪些?为什么细菌的广范围PCR通常选用16S核糖体RNA(16S rRNA)基因作为靶基因?16S rRNA基因作为广范围PCR的靶基因有何优点和缺点?答:常用于细
5广范围PCR应用于病原细菌、真菌的检测和鉴定时,为什么常与DNA测序的序列分析相结合?答:广范围PCR能检测某一类(或某一大类)微生物特定基因的部分序列,但需要对扩增的目的片段进行
6答:广范围PCR进行病原菌的检测的最大优点在于其广谱性,即一套引物就能扩增出一大类亲缘关系相近的微生物,能节省引物合成的所需的成本和时间,并在未知病原体的发现和鉴定中扮演
7答:广范围PCR是PCR技术一个重要的改进,与针对某种特定微生物专门设计的特异PCR所不同,广范围PCR是针对某一类或某一大类的微生物设计的通用型PCR技术。例如,在使用普通PCR技术诊
8答:CLSI MM18-A《DNA靶基因序列分析鉴定细菌和真菌的解释标准;批准指南》详细菌介绍了基于广范围PCR(broad-range PCR)的基因测序和序列分析在纯培养细菌和真菌鉴定中的应用,包括
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