二、PCR‐SSCP技术的影响因素

如果扩增条件未充分优化，扩增的特异性不强，则经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后区带弥散不清，无法辨认所需的单链。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛作用，其孔径的大小直接与丙烯酰胺的浓度及丙烯酰胺与交联剂（N，N，‐亚甲双丙烯酰胺）的比例有关。如无恒温电泳装置时，可考虑在较低电压下电泳，将电泳槽置冰箱中，或以循环水冷却，或适当降低凝胶厚度。有少数变异序列只能在无甘油的凝胶中被检测出来，且甘油的存在可使ssDNA泳动减慢，不同序列的ssDNA的泳动差异可能被放大或缩小，操作者最好在预实验后决定是否采用甘油凝胶及甘油的合适浓度 ......