体外细胞转染效率的评价可以通过质粒构建时引入报告基因,定量检测细胞中报告基因的表达水平来进行。报告基因的优点是细胞内背景活性低,而且可以将细胞表面的信号放大,产生一个灵敏度高,易于检测的反应。选择报告基因的原则包括:①报告分子应不存在宿主细胞中或易于和内源性基因相区别。报告基因的表达必须不改变受体细胞或生物的生理活性。如增强型黄色荧光蛋白是野生型绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的一个黄绿色变种,它不仅保留了GFP作为报告基因的优点,如性质稳定,无需酶和底物,可以在不进行细胞固定和标本准备的情况下进行外源性基因表达分析,而且。
……