所提取的总RNA可直接用于cDNA的合成,一般不需要进一步的酚和氯仿的提取和纯化,可节约时间,但cDNA的合成可能会受稍许影响。最佳的Mg2+浓度,退火时间,延长反应时间,循环次数以及cDNA的变性等都能减少非特异性引物的结合。