[解剖学&组织学]（一）DNA探针的制备和标记

双链DNA分子的一条链有切口时，大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ可把核苷酸残基加到切口处的3 ′羟基端。由于高放射性活度的核苷酸置换了原来的核苷酸，可合成较高放射活性的DNA探针。将待标记的DNA探针片段变性后与随机引物杂交，以此杂交的寡核苷酸为引物，在大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenowlargefragment，此酶不具有5 ′ → 3 ′外切核酸酶活性）的催化下，合成与探针DNA互补的DNA链，使用［ a‐32P ］ d ATP前体。制备单链DNA探针常用的方法是用M13噬菌体载体合成单链DNA探针。4）本法主要适用于M13噬菌体的DNA片段的标记。