揭去头皮,切下头盖骨,将头盖骨置于磷酸缓冲液(PBS)或D-Hanks液内。清除骨膜、血管等结缔组织,用PBS或D-Hanks清洗2次后将洗净的头盖骨剪成1mm2小片。将骨小片移入5ml 0.25%胰蛋白酶溶液内,37℃下预消化20min,弃消化液。将2次消化获得的细胞悬液混匀,计数。按需要密度接种于培养瓶或皿,置5%二氧化碳培养箱中培养。半汇合后传代。