四、caspase‐3活性检测

Caspases是一类天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶，活化的caspase‐3仅在凋亡细胞中发现，是多种组织、细胞类型中最常涉及的关键性凋亡执行分子。将荧光物（AFC）与caspase‐3特异的底物序列DEVD连接，共价耦联后的DEVD‐AFC不发荧光，活化的caspase‐3水解其特异底物，释放裂解产物AFC，自由的AFC才能被激发产生荧光，caspase‐3活性与荧光强弱成正比，由此检测caspase‐3的活性。凋亡细胞内活化的caspase‐3断裂为大亚基17kD或19kD，会因不同的细胞种类而不同，有时因为剪切方式会出现两条小亚基12kD，凋亡诱导组可见相对分子量约为20kD的活性亚单位条带增强，提示caspase‐3活性增高。