[文献资料]二、裂解细胞

用于提取哺乳类细胞蛋白质的裂解缓冲液有以下几种，在不清楚被检蛋白质性质的情况下，一般用第1种和第2种缓冲液。向培养皿中加入裂解缓冲液(表13‐3数值可作参考),冰浴20min。用细胞刮刀刮下培养皿中的细胞,将裂解缓冲液及细胞碎片转移至一预冷的Ep管中。PMSF(一种蛋白酶抑制剂)对呼吸道粘膜、眼睛及皮肤等极具毒性,如被吸入或接触到皮肤，应立刻用水冲洗。由于PMSF在水溶液中不稳定，所以要在临用前再加入裂解缓冲液中。其贮备液为每ml异丙醇中含17.4mg PMSF，保存于－ 20℃。上述步骤均应在冰浴的条件下进行,以免蛋白酶抑制剂失活而导致蛋白质的降解。