蛋白质是一类复杂的高分子聚合物,所含亚单位L‐氨基酸具有手性特异性,能特异性地键合小分子,对手性分子具有很强的识别能力。按来源不同,蛋白质类手性固定相可分为:白蛋白类、糖蛋白类、酶类和其他蛋白类。蛋白质类色谱柱一般在反相条件下使用,流动相的离子强度、pH值、有机改性剂的极性和浓度、温度等因素对立体选择性和保留时间有很大影响。牛血清白蛋白是一个球形的传输蛋白质,由Allenmark等人于20世纪80年代开发,适用于阴离子型的中性化合物的拆分,如氨基酸及其衍生物、香豆素类、芳香亚砜、二苯乙醇等。胰蛋白酶和α‐胰凝乳蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶,适用于氨基化合物和酯类化合物的拆分。
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