新生一日龄SD大鼠,75%乙醇浸泡15min,揭去头皮,取出头盖骨,剔除附着的结缔组织,PBS冲洗三次,用0.25%胰蛋白酶预消化25min,再用0.1%Ⅱ型胶原酶消化,37℃振荡,60次/分,1h × 2次,1000rpm离心10min。细胞经PBS洗后,加入含10%的NCS-MEM培养液培养,第二天更换培养液,以后每2~3d换液一次。以红染,边界清晰,短径大于200 μ m的标准,在40倍光镜下对整个培养孔计数矿化结节。