-
如何检测某一类ESBLs？
答：每一类ESBLs，可设计一个通用引物进行PCR检测，实际检测时可以参照部分文献中提供的引物，常用的引物见表5-1-1。PCR体系：50μl，其中buffer 5μl，dNTP 4μl，引物各0.25μl，聚
2 -
CTX-M型ESBLs可分为几组？
答：根据其氨基酸序列的同源性，可以将CTX-M 型ESBLs大致分成五组，第一组包括CTX-M-1，-3，-10到-12，-15，-22，-23，-28，-29和CTX-M-30；第二组包括CTX-M-2，-4到-7，-20和Toho-1；第三组包括CTX-M-8
3 -
如何确定某一菌株所产ESBL的基因型？
答：对于表型研究中怀疑或者确认有ESBL的细菌，可以先用每一类ESBLs的通用引物进行PCR扩增，然后选取相应的测序引物（下表）进行PCR扩增及测序，将测序所得序列进行比对后确认其基因型
5 -
质粒AmpC酶可分为几类？
答：目前质粒AmpC酶已经有40多种，根据氨基酸的同源性及进化树分析，将其分为六群：来源于枸橼酸杆菌的CIT群；来源于阴沟肠杆菌的EBC群；来源于摩根摩根菌的DHA群；来源于蜂房哈夫尼亚菌
9 -
多重PCR检测质粒AmpC酶的步骤是什么？
答：①热裂解提取DNA：取过夜纯培养细菌单一菌落，接种至5ml LB肉汤，37℃过夜培养，取1.5ml菌液转至Eppendorf管，13 200rpm离心5分钟，去上清，在沉淀中加入500µl双蒸水，95℃加热10分
13 -
对各型别质粒AmpC酶基因检测中应该注意哪些问题？
答：质粒AmpC酶目前有40多个型别，对每个型别的PCR检测中，应该注意引物的特异性。自己设计引物需要一定的经验，所以最好是借用已得到公认的文献中的引物。退火温度：不同PCR仪的性能
14
