[文献资料]（三）PCR反应条件

根据PCR扩增原理，通常PCR的温度变化涉及变性、退火和延伸3个温度，分别为90 ～ 95 ℃ （变性） 、 40 ～ 60 ℃ （退火）和70 ～ 75 ℃ （延伸） 。如待扩增靶核酸片段较短（ 100 ～ 300bp ） ，如实时荧光PCR的扩增，可采用两个温度，即变性温度和退火与延伸温度。虽然退火温度的选择通常是低于Tm约5 ℃ ，但较好的选择合适退火温度的方法是采用梯度PCR仪进行试验，从而选择最佳的退火温度。一般循环次数为30 ～ 40次，次数越多，非特异性产物的量亦多。 ......