二、长距离PCR

普通PCR一般可以扩增5kb以内的片段，大于10kb的片段称为长距离PCR。虽然扩增反应的实质没有根本的变化，但较长片段的扩增反应在许多方面不同于普通PCR。另外，长片段的扩增对模板的长度和质量要求也更高。一般来说模板DNA的长度要大于目的片段的一倍，例如要扩增一段10kb的片段，模板则需要有相当数量的20kb长度的片段。但模板的长度变大又无疑增加了解链变性的难度。而且，模板和产物的长度过长更容易形成复杂结构而造成局部扩增困难，或导致非特异性扩增。通常引物设计时寡核苷酸数目达到22～30个，Tm值和反应时 ......