[治疗]【32P 标记技术】

放射性标记法研究蛋白质磷酸化的传统方法是将放射性核素32P标记到磷酸化蛋白质上，经一维或二维凝胶电泳进行分离，然后通过放射自显影来检测磷酸化蛋白质。若要进一步分析磷酸化位点，则需要通过蛋白酶解消化，再通过Edman降解或质谱对肽段进行测序。此方法的灵敏度高，其局限性在于为获得高特异性标记，需要大量的放射性32P ，也需要大量的磷酸化蛋白质。丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸化/去磷酸化代谢速率不同，所以掺入32P的速率也不同。对某些磷酸转换速率较低的磷酸化蛋白质，可能检测不到。将放射性计数高峰段合并,冷冻干燥。 ......