[辅助检查]（四）巢式引物PCR（nested primer PCR）

当用普通PCR扩增的非特异性扩增较强，而预期大小的PCR产物很少时，可采用巢式引物PCR。这种方法最早用于从人DNA用K lenow酶扩增β珠蛋白基因片段。如果在两套引物设计时，使外侧引物的复性温度明显高于内侧引物（如外侧引物较长，25～30个碱基，含较多GC，而内侧引物较短，15～17个碱基，含AT较多），这样，PCR一开始时就可以将两套引物一起加入反应系统中。在设计循环参数时，使外侧引物先在高温退火温度下做双温循环扩增。在高退火温度下，内侧引物不能与模板DNA稳定结合成双链，因而不起作用。经几次循环后 ......