取新鲜肺组织,Hanks液充分冲洗,用眼科剪去除脏层胸膜。取表面3~5mm的外周肺组织,切割成为1mm 3大小的组织块,Hanks液冲洗,100目的尼龙网过滤。将网上组织块接种于培养瓶底,间距约1cm,瓶底朝上,置5%CO 2孵箱内。2小时后(不能超过4小时)加入DMEM培养基(含20%新生牛血清、100U/ml的青霉素、100 μ g/ml链霉素),静置培养72小时后去除组织块,3~4天换一次培养液。微球表面细胞单层汇合后用0.05%胰酶消化传代。 ......