双光子显微镜是基于双光子激发的荧光显微镜,双光子激发指荧光分子同时吸收两个较低能量的光子被激发的现象,其效果等同于荧光分子被一个高能量光子激发(图44-1 ) 。总之,双光子显微镜组织穿透深度大、光毒性和光漂白效应小,与共聚焦显微镜相比,更适合厚样品以及细胞的长时间观测,在三维参数( x 、 y和z轴)分析的基础上加上时间参数,可获得四维图像,动态观察细胞的运动、迁移和细胞间的相互作用。其次,尽管双光子显微镜整体光漂白作用较共聚焦显微镜极大的降低,但焦点平面处的光漂白效应还是不容忽视。 ......