[概述]四、药物代谢酶的活性测定

P450酶的含量测定:还原状态下的P450酶可与一氧化碳结合,形成复合物，当应用紫外分光光度计，测定时，可在波长450nm处出现最大的吸收峰，可根据峰高测定值的大小计算P450酶的含量。NADPH‐细胞色素P450还原酶活性测定:NADPH在反应系统中作为e-给予者,而P450酶作为e －的接受者，在NADPH‐细胞色素P450还原酶的酶促下，氧化的P450酶转变为还原型。目前已知的GST五种亚型，胞浆中总酶活性测定通常选用1‐氯2，4‐二硝基苯（CDNB）作底物，CDNB与谷胱甘肽结合后形成复合物，在340nm处有吸收峰。在待测样品中，加入对羟基联苯（溶于二甲基亚砜），在激发光290nm、吸收光325nm处测定荧光强度，以硫酸奎宁作相对标准计算酶活性。