二、睾酮高灵敏时间分辨荧光免疫分析（TRFI A）检测方法

睾酮高灵敏时间分辨荧光免疫分析（time‐resolved fluorescence immunoassay，TRFI A）检测方法。TRFI A采用异硫氰酸苄基二亚乙基三胺四醋酸铕（Ⅲ）（DTTA‐Eu）为双功能螯合试剂，其一端螯合Eu3 ＋，另一端可与蛋白质的‐NH2连接。睾酮标准品及睾酮‐BSA（testosterone‐3‐CMO‐BSA）。TRFI A测定方法采用竞争法:先在包被睾酮的96孔微孔板上，每孔依次加入50 μ l睾酮标准品或待测样品，100 μ l以反应缓冲液适当比例稀释的羊抗人睾酮多克隆抗体，25℃振荡孵育30min后，洗涤4次。另有市售的小鼠（Mouse）睾酮（TESTO）ELISA检测试剂盒。TESTO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。