[文献资料]二、G 蛋白活性检测

G蛋白的两种特性可用来在纯化过程中对其进行检测α亚单位的GTP结合位点和细菌毒素的ADP‐核苷化（ADP‐ribosylation）。任何有高亲和力GTP结合位点的蛋白都可能用此法检出。腺嘌呤核苷酸不能与G蛋白结合，但当其浓度在1～10mmol／L之间时，能进一步提高GTP结合的特异性。原则上使其胆酸盐的含量不高于0.1%，结合位点的浓度在0.01～0.50 μ mol／L之间。4 ﹒在每个标本管中加入2ml冰冷的滤过液，并立即在真空抽滤条件下使标本滤过硝酸纤维素滤膜，再以2ml冰冷的滤过液抽滤洗涤该滤膜。如果是已经纯化的G蛋白，则其ADP‐核苷化反应可以通过三氯醋酸沉淀及过滤法定量。加入ATP,有助于降低非特异结合。