取出重泡胀液解冻,以13cm胶条为例,将30~100 μ g样品和重泡胀液充分混合,总体积为250m l。强酸和强碱的梯度用加样杯上样法所得的结果较好。上样量大(>1mg)需凝胶面朝上进行电泳。在加上滤纸和上样盖之前,往持胶器中加入4m l石蜡油。滤纸需先浸泡在去离子水中,然后插入电极和IPG胶条之间,用来隔离盐离子以及等电点在pH梯度之上或下的蛋白质。在重泡胀或电泳过程开始后,可将胶条从常规持胶器移至加样杯上样持胶器上。但由于表面经过了特殊处理,不能接触强酸和强碱,包括碱性去污剂。如果胶条面朝上进行电泳,那么小峰上就不会有压力。
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