为了研究两种物质在同一神经元或其突起和终末内的共存现象,或含不同化学物质的两种结构之间的相互关系,可以使用双重免疫标记技术。抗原‐抗体反应完成后,首先用DAB/H2O2与过氧化物酶进行呈色反应,产生褐色沉淀,经洗涤后,再用萘酚AS‐MX/固蓝BB(naph‐thol AS‐MX/fast blue,BB)与碱性磷酸酶进行呈色反应,产生蓝色沉淀,借以区分两种抗原的定位。在研究下丘脑甾类激素和神经垂体激素合成的过程中,将[ 3H ]标记的雌二醇皮下注射于切除卵巢的小鼠,先作放射自显影,再作PAP法免疫细胞化学反应,结果在视上核的神经细胞内观察到细胞核有高浓度的银粒沉着,胞浆呈神经垂体激素载体蛋白免疫反应阳性。
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