3﹒CBSA的制备、鉴定和巯基化

将250ml 0.9mol／L的乙二氨溶液缓慢加入到4m l 50%牛血清清蛋白（BSA）中，搅拌，用盐酸调节至pH 4.75，加入缩合催化剂EDAC 360mg。5）中，以CBSA：2‐iminothiolane摩尔比为1 ∶ 40室温搅拌1小时，经Sephadex G‐100凝胶层析柱分离过量2‐iminothiolane，即得巯基化CBSA。采用5，5 ′‐二硫代‐双‐（2‐硝基苯甲酸）（DTNB，Ellman试剂）测定蛋白质的巯基化程度，CBSA的巯基化程度为1.5mol巯基／molCBSA。