第三节 PCR和real time PCR方法

PCR（poly merase chain reaction，聚合酶链反应）是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括三个基本步骤：①变性（denature）：目的双链DNA片段在94℃下解链。退火(anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对.延伸(extension)。以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下，以目的DNA为模板进行合成。RT‐PCR注意防止RNA降解。