本法是双缩脲反应的发展,它结合了双缩脲法中铜盐反应和Folin试剂反应的特点。试剂甲相当于双缩脲试剂,可与蛋白质中的肽键起显色反应。试剂乙在碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。所以,此法是通过肽链或极性侧链的铜络合物较慢反应及芳香族氨基酸的残基、酪氨酸、色氨酸的迅速反应,把磷钼酸、磷钨酸发色团还原成暗蓝色(磷钼蓝),颜色反应和蛋白质含量在一定范围内呈线性关系。样品测定:组织匀浆提取液适当稀释后(蛋白质含量在20~250 μ g)取0.4ml,同标准曲线绘制操作程序,测定A750,从标准曲线上查出相应的蛋白质的含量。100、4mol/L盐酸胍、3mol/L尿素对测定均无影响。
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