蛋白质含有2个以上的肽键,有双缩脲(H2N‐CO‐NH‐CO‐NH2)反应,此法也因此而得名。5、0.6ml标准蛋白质溶液,用水足至1ml,各加入双缩脲试剂4ml,混合均匀,在室温(20~25℃)放置15~30分钟,在A450处测定,以各管中的蛋白质含量为横坐标,A450值为纵坐标绘制标准曲线,得出直线回归方程及相关系数(r)。双缩脲法的结果,不因蛋白的种类不同而变化,这是此法的优点。在有大量糖类共存或含有脯氨酸的肽中,测定值可能偏低,并且不适用于不溶性样品的测定。