[速览]5﹒蛋白切割——蛋白的水解

蛋白水解是利用一些蛋白酶进行的，是蛋白质组工作中的一项常规方法。蛋白水解在应用上有专一性高、副反应少、剪切效率高等优点。蛋白酶切水解过程中要考虑如下一些因素：酶切缓冲液及其所需的最适pH值、酶与底物的浓度、酶切的温度以及酶切时间等等。在所有已知的蛋白酶中，胰蛋白酶是最常用的。考马斯亮蓝通过离子键和疏水相互作用与蛋白质结合而使蛋白质着色，它里面的磺酸基团与蛋白质的碱性基团如赖氨酸、精氨酸残基形成的离子键使胰蛋白酶的酶切效率大大下降。本书中所介绍的2‐D电泳方法中，半胱氨酸残基在电泳前被定量地还原和烷基化了。若电泳后进行蛋白酶切之前，要重复这些步骤，务必要使用同种试剂！