[文献资料]四、β-内酰胺酶粗提液的制备

测定和研究BLA时必须首先制备酶粗提液，进行生化研究时还要用等电聚焦法证明粗提液中只有一种BLA 。如果粗提液中存在多种BLA活性，必须用凝胶过滤、离子交换层析、等电聚焦电泳等技术对粗提液实施纯化。BLA的释放：超声波法:将洗涤过的细菌细胞重悬于4 ℃预冷的缓冲液中，在12 ~ 24 μ m波幅下（或200W超声细胞破碎仪）超声破碎2 ~ 4次，每次30s ，间隔期间置于冰上。为了检测BLA的释放情况，可取几毫升溶液，于4 ℃ 、 10000rpm条件下离心1 ~ 2min ，用头孢硝基噻吩测定上清液的酶 ......