三、PCR测定条件的优化

引物长度为15～30bp，一般为20～27bp。C ＋ G含量为40%～60%，引物中4种碱基的分布是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在，尤其是在3 ’端不超过3个连续的G或C。引物自身不宜存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构或引物本身复性，引物自身连续互补碱基不能大于3bp。引物间不应有互补，尤其避免3 ’端互补以防形成引物二聚体，一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。稍低的退火温度与较长的退火时间有利于提高敏感度，反之可提高特异性，应根据引物及扩增效果进行调整。进行RT‐PCR时，所 ......