七、基因型耐药检测常见问题分析及解决方案

模板:①模板中含有杂蛋白质.模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白。模板核酸变性不彻底。Mg 2+浓度:Mg 2+浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败。物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低、变性时间短，极有可能出现假阴性。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪的变性、退火和延伸温度，如果PCR仪的温度不准确，也可导致PCR扩增失败。靶序列:如靶序列发生突变或缺失,则影响引物与模板特异性结合，或因靶序列 ......