通过抗原-抗体特异性结合,并在二抗上耦联不同酶、荧光基团或放射性元素,再加入底物或激发光源,可使蛋白结合部位的膜显色或发光,从而对转印在膜上的蛋白进行定性或定量分析。大部分多克隆抗体都含有针对数种抗原表位的抗体,而单克隆抗体只能识别一个抗原表位,选择单克隆抗体时必须经过大量的筛选,才能获得可以识别凝胶电泳后抗原表位的单克隆抗体,因此免疫印迹常采用多克隆抗体。杂交背景与应用抗体的量有关,只有合适的抗体效价,才能获得满意的杂交背景,免疫印迹使用的多克隆抗体效价与间接ELISA法确定的抗体效价相当或高一个级别。 ......