七、表达质粒的制作

克隆基因的表达，除了需要启动子外，还要有Shine‐Dalgarno（SD）序列。SD序列（AGGAG）位于－ 10及翻译起始密码子（initiationcodon）ATG之间，是mRNA与16SrRNA结合时所需。SD序列与ATG之间的距离，会影响基因的表达。故通常利用PCR先扩增欲表达的基因，并在所扩增DNA的5 ’端加上可与Nco Ⅰ切点连接的序列，及于其3 ’端加上可与BamH Ⅰ切点连接的序列，以利于基因的克隆。限制性内切酶切割DNA时，除了需要特殊的辨认序列外，还需要几个额外的碱基才能与DNA ......