[速览]三、磷酸化蛋白质或多肽的分离和富集

由于体内磷酸化蛋白的含量较低，而且在对磷酸化肽段进行质谱检测时，其酸性电荷导致肽段离子化效率降低，产生的信号强度较低，因此，在质谱分析前应对磷酸化蛋白和肽段进行有效的富集。以下介绍常用的几种富集磷酸化蛋白和磷酸化肽段的方法。Knight等报道了一种在磷酸化位点特异酶切的技术，先将磷酸化丝氨酸和苏氨酸残基进行β-消除反应，然后用半胱胺作为加成试剂，得到的氨基酸是胰酶的酶切位点，这样酶切得到的磷酸肽的磷酸化位点都在肽段的C-末端，使磷酸化位点的鉴定更加容易。 ......