（二）Sanger 双脱氧链终止法

Sanger在双脱氧链终止法中独创性地使用了特异引物，在DNA聚合酶的作用下进行延伸反应。由于在体系中加入了2 ′，3 ′双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），当它们掺入正在合成的新链DNA后，由于其脱氧核糖的3 ′位缺少一个羟基，从而不能与后续dNTP的5 ′磷酸基团之间形成磷酸二酯键，新链DNA的合成终止。这样，在DNA合成体系，既有正常反应所需的4种dNTP，又有一定比例的ddNTP，新合成的DNA链在可能掺入这种dNTP的位置也可能掺入同种ddNTP，导致新合成的链在凡是应该掺入该种核苷酸的位置均有可能 ......