一、获得目的基因并克隆入原核表达载体

目的基因采用PCR技术从人白血病建系细胞HL-60 cDNA文库中扩增获得。PCR结束后，取20 μ l反应物，进行1%琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增情况，并割下含有hTNF基因片段的凝胶条进行目的DNA片段的回收，并将PCR扩增的产物克隆到pUC18载体的EcoR Ⅰ与BamH Ⅰ之间，以便对重组子进行基因测序。用菌落PCR方法鉴定重组子，对阳性克隆进行扩增、质粒提取和酶切鉴定，并对初选正确的克隆进行序列分析。 ......