四、杂交后洗涤

杂交后洗涤主要是洗脱去除未参与杂交的过剩探针、探针与组织标本的非特异性结合，从而降低背景，增强信号强度。用RNA探针时，杂交后可用RNA酶处理，因为RNA酶使未杂交的单链RNA探针降解，而对RNA‐RNA杂交体无作用。杂交后洗涤时先除去盖玻片，不要用镊子硬性剥离盖玻片，让盖玻片自然脱落，以免破坏组织。值得注意的是，杂交后洗涤、检测到信号放大、复染，一定要保持标本的湿润，以免影响抗原抗体反应，提高背景。一般在杂交信号放大完毕后进行全部核酸物质的荧光染色，以便观察杂交信号的染色体位置或细胞中的位置。需要时取出 ......