方案六 可溶性蛋白3D LC/MS/MS蛋白质组分析方法

收集菌体，重悬于裂解缓冲液（750mmol/L磷酸盐缓冲液，pH8.0，添加蛋白酶抑制剂cocktail 1，每20克细胞添加1ml）中。重悬液使用French pressure cell进行裂解,裂解完成后，150 000g，4℃离心2h，收集上清，即为细胞的可溶性蛋白质部分。Sephacryl S-400柱与Agilent 1100 HPLC配套使用,以100 μ l/min的速度进行洗脱，洗脱开始45min后开始收集样品，每5min收集一管。消化后的各部分样品真空离心浓缩到少于1毫升,加入约1%（v ......