[诊断]（一）引物设计

寡核苷酸引物长度为15～30bp，一般为20～27bp。引物的有效长度：Ln ＝ 2（G ＋ C）＋（A ＋ T），Ln值不能大于38，因为＞ 38时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃），不能保证产物的特异性。引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。3、4位的错配对扩增量影响不大，但易出现非特异性扩增和引物二聚体。引物的5 ′端引物的5 ′端限定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。还有其他一些处理的方法：如尿嘧啶DNA糖基化酶法，固相捕捉法，RNA酶特 ......