第十节　Western Blotting——多个环节需注意

去年至今，我一直以western blotting方法陆续检测一些蛋白。该方法的技术原理是：将经过PAGE分离的蛋白样品在电场作用下转移至固相载体上（固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及生物学活性不变） ，以其作为抗原与相应的抗体进行特异性免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗反应后经底物显色或放射自显影。该方法的protocol种类繁多，但均大同小异，基本为下述几个步骤：提取细胞或组织抗原蛋白、制备分离胶与浓缩胶、上样、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗作用与显色发光。要得到一个完美 ......