[辅助检查]第二节 定量PCR方法

目前的定量PCR方法基本上可归为三大类，即外标方法、动力学方法和内标共扩增方法。目前国内所使用的TaqMan荧光定量PCR测定技术均为外标定量方法，仪器实时连续测定由于扩增过程的发生所致的荧光，以达到指数扩增时的循环周期数（Ct值）作为计算依据，即将图8 － 1中纵轴的OD改为Ct值来计算。因此，建议在所有应用定量PCR测定时，使用待测模板的稀释系列构建一个外标准曲线，从而建立一个对扩增效率和能可靠定量的浓度范围的质控。因此，使用这种方法进行RNA的定量PCR测定极为困难。由于竞争性PCR可排除管间和样本 ......