[概述]二、基因打靶技术的常用策略

插入型打靶载体设计时，选择基因在同源序列之外或之内，导入宿主细胞前，需将打靶载体在同源区作一线性切口，以提高同源重组的效率。插入型载体与靶基因在同源区发生一次单交换后，将使整个载体插入染色体同源区，从而使同源序列增加一个拷贝。这种方法的缺点是不能直接区别和筛选出外源DNA定点整合的细胞克隆和随机插入的细胞克隆，留下的选择标记及其启动子、增强子可能会影响邻近基因的表达，并且产生的串联重复序列不稳定，有可能发生第二次重组。这是基于一种正‐负选择系统的策略，也是目前最常用的基因打靶策略。 ......