五、RNAi的技术要点和关键

1 ﹒由于最有效的si RNA的3 ’端带有d（TT）或UU突出物，因此设计时首先寻找目标m RNA上的AA序列作为si RNA的起点。体外转录法通常在两个体系里分别转录si RNA的正义链和反义链，然后把产物混合退火形成si RNA，用RNase消化除去多余的核苷酸序列，再经多步提纯才能得到适合转染的纯化的si RNA。另外，也可以由两个启动子分别引导正义链和反义链的合成，既可由同一载体转录也可以由两个载体分别转录。使用的病毒载体主要有慢病毒载体、反转录病毒载体、腺病毒载体等。 ......