DNA重组操作之前需要明确DNA重组的基本目的,并依此选择合适的载体及获取目的DNA片段的方法。例如,目的DNA片段两端的酶切位点通常是依据载体的酶切位点进行设计,可以采用目的DNA内部的酶切位点,也可以额外加上酶切位点。当采用两个同尾酶时,酶切位点的序列虽然有差异,酶切后的末端单链序列是相同的,可以互补配对及连接,连接端已不再是任何一个酶的酶切位点,使连接后的二倍体DNA片段还可用同样的酶处理末端用于串联。为了这样的目的,扩增DNA单体片段时的上下游引物就需要分别设计两个同尾酶的酶切位点。 ......