平端连接方法为DNA随意连接提供了广大空间,但连接效率低也是日常进行DNA克隆操作时遇到的头痛问题,通常在对载体5 ′端去磷酸基团的同时,采用低温下长时间(一般4℃过夜)的连接,即使如此,连接效率仍然很低。平端连接的反应体系可以从以下几点进行优化:①低浓度ATP(0.5mmol/L)。 ......