四、以PCR方法改变基因

若欲改变的基因没有任何限制性内切酶的切点，就必须用PCR的方法来进行基因突变。例如欲改变一段DNA上的某个碱基，可利用两套含有所需突变的引物，分别扩增此DNA，再将合成出的两段PCR产物连接起来而得到有突变的双股DNA（图15‐。由于这两条引物的5 ’端序列互补，而欲改变的碱基位于此互补序列中，故合成出的PCR产物，第一段DNA的5 ’端与第二段DNA的3 ’端有一部分的序列是相同的。若将这两PCR产物变性成单股，则第一段DNA负股的5 ’端与第二段DNA正股的3 ’端，会由于序列互补而结合，之后再将单股 ......