发病早期留取血清或脑脊液用以分离病毒,但阳性率较低。如对照鼠正常,而接种标本的小鼠表现松毛、弓背、震颤、绕圈、后肢麻痹、继而死亡者,则解剖取鼠脑组织制成接种样本,再接种小鼠。接种小鼠经7 ~ 14天观察无发病时,则解剖其中2只小鼠,取脑组织制成样本传代,再观察2周如仍无发病死亡,即按未分离出病毒报告。置37 ℃培养4天, 48小时后对照鸡胚正常,而接种样品鸡胚死亡或4天后未死亡的鸡胚,则取出鸡胚磨碎,用碱性肉汤制成10%悬液, 3000rpm离心30分钟,取上清液接种小鼠,如小鼠发现死亡时,解剖取脑组织, ......