[文献资料]第二节 RNA的分离纯化技术

RNA分离中的难点是多数核糖核酸酶（RNase）都非常稳定并且活性高，不需要任何辅助因子就能进行酶解反应。因此，所有RNA分离提取中，第一步都是在能使RNA酶失活的化学环境中裂解细胞，才能分离提取RNA。去污剂可以解聚核酸与蛋白质的结合，并且与蛋白质带正电荷的侧链接合，在高盐存在下形成SDS‐蛋白质复合物而沉淀。焦碳酸二乙酯:焦碳酸二乙酯（DEPC）是很强的核酸酶抑制剂，通过与蛋白质中组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性。弃上清后立即加1倍细胞体积的变性液(NP‐40法为裂解缓冲液)。4 ﹒离心后分3层：上层（ ......